iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和TMT(Tandem Mass Tags)技術(shù)是分別由美國(guó)AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這兩種技術(shù)采用多個(gè)（2-10）穩(wěn)定同位素標(biāo)簽，特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析，能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量，可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。

對(duì)于可以傳代的細(xì)胞樣品來(lái)說(shuō)，我們可以采取SILAC的方法完成對(duì)于細(xì)胞蛋白質(zhì)組的標(biāo)記過(guò)程，但是許多其他研究體系，比如組織樣品以及不能進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞來(lái)說(shuō)，需要其他的標(biāo)記方法來(lái)完成定量蛋白組學(xué)分析。TMT, iTRAQ等基于體外（in vitro）標(biāo)記的定量方法應(yīng)運(yùn)而生。

iTRAQ標(biāo)簽包括三部分，如下圖：

1. 報(bào)告基團(tuán)（reporter group）：指示蛋白樣品豐度水平。
2. 平衡基團(tuán)（balance group）：平衡報(bào)告基團(tuán)的質(zhì)量差，使等重標(biāo)簽重量一致，保證標(biāo)記的同一肽段m/z相同。
3. 肽反應(yīng)基團(tuán)（amine-specific reactive group)：能與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價(jià)連接，從而標(biāo)記上肽段。

iTRAQ和TMT標(biāo)簽結(jié)構(gòu)圖

來(lái)自不同樣品的同一肽段經(jīng)TMT/iTRAQ試劑標(biāo)記后具有相同的質(zhì)量數(shù)，并在一級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)（MS1）中表現(xiàn)為同一個(gè)質(zhì)譜峰。當(dāng)此質(zhì)譜峰被選定進(jìn)行碎裂后，在二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)（MS2）中，不同的報(bào)告基團(tuán)被釋放，它們各自的質(zhì)譜峰的信號(hào)強(qiáng)弱，代表著來(lái)源于不同樣品的該肽段及其所對(duì)應(yīng)的蛋白的表達(dá)量的高低。TMT/iTRAQ定量蛋白組學(xué)研究因其測(cè)定精準(zhǔn)度高適應(yīng)樣品種類多，目前已有很廣泛的應(yīng)用。百泰派克在傳統(tǒng)的TMT/iTRAQ分析技術(shù)的基礎(chǔ)上，提供TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技術(shù)，使用三級(jí)碎片報(bào)告離子進(jìn)行定量，可進(jìn)一步提高TMT/iTRAQ定量蛋白組學(xué)分析的精度，進(jìn)一步提高定量準(zhǔn)確性。

百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái)，Orbitrap Fusio Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，推出基于TMT/iTRAQ/MultiNotch MS的定量蛋白組分析服務(wù)技術(shù)包裹，您只需要將您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康母嬖V我們并將您的蛋白寄給我們，我們會(huì)負(fù)責(zé)項(xiàng)目后續(xù)所有事宜，包括蛋白酶切、肽段標(biāo)價(jià)、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。

iTRAQ/TMT定量蛋白組學(xué)分析實(shí)驗(yàn)流程

iTRAQ 8-plex定量蛋白組學(xué)分析流程

iTRAQ/TMT定量蛋白組學(xué)分析技術(shù)特點(diǎn)

? 高通量定量蛋白分析：可以同時(shí)分析10個(gè)樣品；適合大量臨床樣本，多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物
? 體外標(biāo)記，適用于分析組織，細(xì)胞，血液等多種樣品
? 質(zhì)譜分析靈敏度高，可檢測(cè)較低豐度蛋白，大范圍比較蛋白相對(duì)豐度
? 可與富集磷酸化等修飾肽段的方法聯(lián)用，更準(zhǔn)確研究翻譯后修飾變化

iTRAQ/TMT定量蛋白組學(xué)分析樣品要求

注意：樣品運(yùn)輸請(qǐng)使用足量的干冰運(yùn)輸，并且盡量選用較快的郵遞方式，以降低運(yùn)輸過(guò)程中樣品降解的可能性。

中/英文項(xiàng)目報(bào)告

在技術(shù)報(bào)告中，百泰會(huì)為您提供詳細(xì)的中英文雙語(yǔ)版技術(shù)報(bào)告，報(bào)告包括：

1, 實(shí)驗(yàn)步驟（中英文）; 2, 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)（中英文）; 3, 鑒定的氨基酸的詳細(xì)信息; 4, 質(zhì)譜圖片; 5, 原始數(shù)據(jù)

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