人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒是埃澤思生物（Applied Cell^?）自主研發(fā)的一款用于人間充質(zhì)干細(xì)胞分化成脂的試劑盒，可用于骨髓、臍帶、脂肪等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的成脂分化。本產(chǎn)品僅限于科學(xué)研究，不能用于臨床診斷、治療，以及其他用途。

產(chǎn)品內(nèi)容

產(chǎn)品特性

l 誘導(dǎo)分化程序簡單便捷。

l 誘導(dǎo)成脂細(xì)胞效率高。

操作方法

1. 相關(guān)材料

? Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?:AC-1001003）

? 人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化試劑盒（Applied Cell^?:AC-1001029）

? 成脂檢測染液（Applied Cell^?:AC-1001022）

? Xeno-Free細(xì)胞消化液（Applied Cell^?:AC-1001024/1001025）

?磷酸鹽緩沖液(1×PBS) （Applied Cell^?: Cat.AC-1001037） 

2.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基的配制

2.1在2-8℃解凍人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化添加劑，輕晃搖勻；

2.2 隨后將添加劑加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基中（10ml 添加劑與90mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基徹底混合）混勻，即為人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基。人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基可在2-8℃穩(wěn)定儲放2周。

注意：人間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪維持添加劑只能在2-8℃解凍，待添加劑加入到培養(yǎng)基以后，請用培養(yǎng)基潤洗添加劑瓶1-2次，因添加劑量較少可防止添加劑粘附在試管壁上造成損失。

3. 實(shí)驗(yàn)操作

誘導(dǎo)成脂（以6孔板為例）

3.1 將傳代或復(fù)蘇凍存的人間充質(zhì)干細(xì)胞接種到6孔板上，密度為2×10⁵ -3×10⁵ cells/cm²或2×10⁵ -3×10⁵ cells/孔，置于37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

3.2 當(dāng)人間充質(zhì)干細(xì)胞融合度達(dá)到80-90%時(shí)，開始誘導(dǎo)脂肪前體細(xì)胞分化。吸掉 Xeno-Free人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，每孔加1ml預(yù)熱PBS清洗一次，吸掉PBS，加入2 ml人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基，以此記為第0天；

注意：人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基使用前需預(yù)熱至37℃。

3.3 每1-2天更換人間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化培養(yǎng)基；

3.4 第5-6天可以看到少量脂滴；

3.5 第9-14天待脂肪滴顆粒成熟即可進(jìn)行拍照，染色。（根據(jù)情況誘導(dǎo)時(shí)間可適當(dāng)延長）

注意：1.培養(yǎng)基每1-2天換液。由于隨著脂肪細(xì)胞的成熟，pH的降低會觀察到培養(yǎng)基變黃。pH從7降到6.5，細(xì)胞增殖會變慢。pH在6.5到6時(shí)，細(xì)胞活力會降低。所以誘導(dǎo)后期，需要每天換液。

2.換液時(shí)盡量不使培養(yǎng)基變干，培養(yǎng)基變干會降低細(xì)胞層對培養(yǎng)皿表面的粘附。

3.細(xì)胞分化效果和供體有關(guān)。供體的年齡是一個(gè)因素。有研究發(fā)現(xiàn)與年長者相比，年輕供體來源的細(xì)胞的分化能力更強(qiáng)。

間充質(zhì)干細(xì)胞在成脂分化1天（A）、5天（B）、13天(C)時(shí)的細(xì)胞照片，可以觀察到成簇的脂滴（200×）

4. 成脂檢測染液染色

4.1每6ml成脂染液加入4ml蒸餾水制成染色工作液，混勻室溫放置5-10分鐘。加入蒸餾水后，染液會有片狀結(jié)晶析出，可用直接使用或?yàn)V網(wǎng)過濾除掉結(jié)晶。

4.2脂肪誘導(dǎo)分化結(jié)束后，吸掉原有培養(yǎng)基，用1×PBS沖洗1-2次。每孔加入適量細(xì)胞固定液， 固定20 min。

4.3吸掉細(xì)胞固定液，用1×PBS沖洗2次。，加入適量染色工作液，使染液完全覆蓋脂肪滴，室溫染色15min。

4.4吸掉染色工作液，用1×PBS沖洗2-3次。

4.5將培養(yǎng)板置于顯微鏡下觀察脂滴染色效果，拍照。

注意：染色后顯微鏡觀察，及時(shí)拍照。如果時(shí)間過長，脂肪滴會發(fā)生破裂。

 間充質(zhì)干細(xì)胞在成脂后染色前（D）和染色后（E）的照片（400×）