新生小鼠心肌細胞分離試劑盒

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

新生小鼠心肌細胞分離試劑盒是埃澤思生物科技有限公司（Applied Cell^?）開發(fā)的一款用于新生小鼠心臟原代心肌細胞分離和培養(yǎng)的產(chǎn)品。本產(chǎn)品提供一種簡單高效的小鼠原代心肌細胞分離方法，該方法為基于心肌細胞的體外藥物篩選以及藥物評估提供了非常好的原料。在細胞分離中，充分優(yōu)化分離過程，以及培養(yǎng)試劑，獲得高純度、高活性的原代心肌細胞。使用本試劑盒進行細胞分離、培養(yǎng)的原代心肌細胞，可表達心肌細胞蛋白標記物和保持細胞收縮性。

產(chǎn)品特性

l 采用二級消化法，特異性除去非心肌細胞，獲得高純度心肌細胞。

l 細胞貼壁效果更好、活性更高。

l 分離心肌細胞產(chǎn)量更高，損失更少。

產(chǎn)品內(nèi)容

實驗準備

A. 使用75%酒精擦拭試驗臺；

B. 準備酒精燈、酒精棉及用于盛放實驗處理后小鼠的垃圾袋；

C. 剪刀、鑷子、微型鑷子等解剖用具需提前進行滅菌處理；

D. 吸取適量Wash Buffer至培養(yǎng)皿中并放置于冰上（細胞房內(nèi)操作）。

注意：細胞房和超凈工作臺需提前進行紫外滅菌處理；培養(yǎng)皿大小的選擇取決于實驗時所取心臟的數(shù)目，Wash buffer一直放于冰上保持低溫。

操作方法

1. 取心臟：

A. 左手捏住小鼠背部皮膚，使用酒精棉（95%酒精）擦拭小鼠胸腹，用解剖剪在小鼠劍突處正中線偏左向上剪開，略壓胸骨，使心臟自然跳出，用彎鑷子勾住心臟根部，取出心臟，置于盛有遇冷Wash buffer的培養(yǎng)皿中。

B. 在解剖鏡下使用微型鑷子和解剖剪剪去心房。

2. 組織清洗和預消化：

A. 經(jīng)酒精擦拭后，將培養(yǎng)皿移入細胞房超凈工作臺，用遇冷的Wash buffer清洗3次，去除血污后，將心臟剪成約1mm³的組織塊，再清洗2次，

3. 將組織塊移入培養(yǎng)瓶中，加入適量Mouse Cell Dissociation SolutionⅠ后放入4℃冰箱消化過夜。

注意：預消化時間可根據(jù)心臟數(shù)目進行調(diào)整，最多不超過24h。

第二天：

1. 實驗準備：

水浴鍋溫度調(diào)至37℃，將Wash Buffer放入水浴中加熱。把心臟從4℃冰箱取出并將其中的心臟和消化液移入一個新的50ml離心管中，加入等量經(jīng)預熱的Wash Buffer, 37℃水浴鍋中搖動消化1min后棄上清；

2. 消化：

A. 在50ml離心管中加入5ml Mouse Cell Dissociation SolutionⅡ，37℃水浴中搖動消化7min后將上清液加入遇冷的10ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium中，混合均勻并置于冰上保持低溫。

注意：每次消化液使用的量可根據(jù)組織塊的多少進行調(diào)整。

B. 重復2.A的步驟直至組織完全消化。

注意：吸取上清時盡量避免吸出沉淀。

C.將收集的上清在常溫下1260rpm，離心5min。輕輕吸除上清，用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重懸細胞。

3. 差速貼壁：

A. 將重懸的細胞經(jīng)過100μm濾網(wǎng)過濾，直接接種到培養(yǎng)皿中，放入細胞培養(yǎng)箱（37℃，5%CO₂）中孵育60-75min。

B. 取上清移至新的培養(yǎng)皿中，重新放入細胞培養(yǎng)箱中孵育60-75min。

注意：孵育時間根據(jù)培養(yǎng)皿貼壁能力可做適當調(diào)整；

4．細胞鋪板：

A. 將Mouse Cardiomyocytes Culture Medium預先在37℃水浴中加熱。

B. 取出培養(yǎng)皿，將上清移入15ml離心管中，530rpm，離心5min，輕輕吸除上清，用已經(jīng)預先加熱至37℃的2ml Mouse Cardiomyocytes Culture Medium重懸細胞。

C. 利用血細胞計數(shù)板進行細胞計數(shù)，用臺盼藍檢測細胞存活率。

D. 根據(jù)所計的細胞數(shù)量使用Mouse Cardiomyocytes Culture Medium進行稀釋調(diào)整細胞濃度，將細胞移至包被好的孔板或培養(yǎng)皿中。

E. 將培養(yǎng)皿放入細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察細胞狀態(tài)，若細胞狀態(tài)佳且濃度合適，則可進行后續(xù)實驗。

細胞形態(tài)圖