Serum-Free干細(xì)胞凍存液

產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品簡介

Serum-Free干細(xì)胞凍存液是埃澤思生物（Applied Cell^?）自主開發(fā)的一款無血清、無需程序降溫的干細(xì)胞凍存液，適用于人多能干細(xì)胞（hES/hiPS）的凍存。本產(chǎn)品生產(chǎn)過程遵循ISO9001體系,并符合GMP指導(dǎo)原則。

產(chǎn)品特性

l 安全：無外源蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險。

l 穩(wěn)定：全程無血清生產(chǎn)，批次間差異小。

l 高效：凍存細(xì)胞復(fù)蘇率高于90%。

l 簡單：即用型產(chǎn)品，且無需程序降溫可直接-80℃過夜后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。

產(chǎn)品內(nèi)容

相關(guān)產(chǎn)品

人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001000）

人多能干細(xì)胞消化液（Applied Cell^?: Cat. no.AC-1001008）

Serum-free細(xì)胞凍存液（Applied Cell^?: AC-1001006）

即用型基質(zhì)膠（Applied Cell^?: Cat. no. C-1001007）

人iPS細(xì)胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001001）

人ES細(xì)胞（Applied Cell^?: Cat. no.AC-2001002）

操作方法

細(xì)胞凍存

1.1  準(zhǔn)備對數(shù)期生長的干細(xì)胞，加入人多能干細(xì)胞消化液（AC-1001008）消化3~5 min，用2mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基（AC-1001000）制備成細(xì)胞懸液；

1.2  1000rpm 3min離心，棄上清，用1.5-2mL Serum-Free干細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，細(xì)胞密度1×10⁶~1×10⁷ /mL；

1.3 轉(zhuǎn)移至凍存管中，無需程序降溫，直接將待凍存細(xì)胞置于 -80℃過夜，后轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存，凍存時注意直立放置凍存管；

細(xì)胞復(fù)蘇

2.1  基質(zhì)膠包被培養(yǎng)板：取出6孔板/12孔板，每孔內(nèi)加入1 mL/0.5 mL即用型基質(zhì)膠（AC-1001007），輕輕晃動6孔板/12孔板使基質(zhì)膠完全覆蓋皿底，置于37℃培養(yǎng)箱中孵育1h~2h，實驗前拿出并置于超凈工作臺/生物安全柜中室溫下平衡20min。如果暫時不用，可用Parafilm封口后2-8℃ 儲存，并于1周內(nèi)使用。

注意：①一支凍存的干細(xì)胞的數(shù)量在1×10⁶cells/mL左右，對應(yīng)6孔板1孔；②即用型基質(zhì)膠對溫度敏感，即用即拿，用完后立即放回4℃冰箱保存，且勿用手直接觸碰基質(zhì)膠液面所及的瓶身，影響基質(zhì)膠質(zhì)量。

2.2  先將2~3mL的干細(xì)胞培養(yǎng)基加入15mL離心管中備用。

2.3  解凍：將從液氮中取出的凍存管快速浸入37℃溫水中，快速搖動，使其在1~2min內(nèi)快速解凍；

注意：細(xì)胞從液氮中拿出的速度要快，盡量減少其暴露在室溫中的時間。

2.4  離心：凍存管中的凍存液解凍后，將其逐滴加入含有干細(xì)胞培養(yǎng)基的15mL離心管中，將15mL離心管置于低速離心機(jī)中配比平衡后，1000rpm離心3min；

2.5  重懸：離心后棄上清加1mL人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基對干細(xì)胞沉淀進(jìn)行吹吸混勻，吹吸3~5次左右。

2.6  接種：吹吸均勻后，將已經(jīng)平衡好的即用型基質(zhì)膠棄掉，將吹打均勻的干細(xì)胞懸液加入到已經(jīng)包被好的6孔板中，并補(bǔ)全每孔2mL培養(yǎng)體系。

2.7  培養(yǎng)：接種后的6孔板可以置于倒置相差顯微鏡下觀察接種的干細(xì)胞密度以及細(xì)胞團(tuán)塊大小，呈4個細(xì)胞以上的團(tuán)塊較合格，水平十字輕輕晃動6孔板/12孔板使細(xì)胞均勻分布。并置于37℃，5% CO₂的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)，第2天觀察細(xì)胞貼壁情況；

細(xì)胞形態(tài)圖

                            ES細(xì)胞復(fù)蘇24h 48h

質(zhì)量控制