黃曲霉毒素(Aflatoxin, AF）是由多種霉菌代謝的毒性產物，例如Asperillus flavus 和Asperillus parasiticus霉菌。他們具有致癌性，存在與谷物、堅果、棉籽和其他人類商品食物中或動物飼料中。谷物可能被黃曲霉毒素的衍生物：B1、B2、G1和G2其中一種污染或者被多種毒素污染。AFB1是目前檢測到的最毒的毒素。其他類型毒素如果污染的濃度很高也存在很大的危險。黃曲霉毒素能夠引發(fā)人類很多病癥包括肝癌、黃曲霉中毒、萊耶綜合癥和慢性肝炎。動物容易攝取到黃曲霉毒素，原因是動物吃的飼料在生長、收割和貯存過程中能被黃曲霉毒素產生的真菌毒素污染。當奶牛吃了被污染的飼料，AFB1在體內羥基化轉化成AFM1，AFM1常在牛乳中被檢測到。如果牛初乳中存在AFM1，針對一般的牛奶處理方法例如巴氏殺菌，但AFM1是非常穩(wěn)定的，它可能一直留存到人類最終消費產品中。世界上大多數(shù)國家的政府已經(jīng)對人類和動物性食品中制定了嚴格的黃曲霉毒素限量標準。很多國家已經(jīng)聲明降低牛奶和奶制品中的AFM1限量標準。歐盟已經(jīng)將牛奶和奶制品中AFM1的限量定為0.05ug/L或者50ppt。

HELICA AFM1 分析測定試劑盒目的是用來定量檢測牛奶、奶粉和乳酪中的AFM1。

HELICA AFM1 分析測定是一種固相競爭酶聯(lián)免疫分析測定方法。聚苯乙烯微孔板中包被抗AFM1的高親和力抗體。將標準品或者樣品加入合適的微孔中，如果存在AFM1，它將和包被的抗體結合。接下來，加入HRP（辣根過氧化物酶）標記的毒素，標記毒素與標準品或者樣品與抗體沒有結合的部位相結合。孵育一段時間后，倒出孔里的液體，清洗后加入顯色底物，在酶的作用下孔里將會出現(xiàn)藍色。顯色顏色的深淺與結合物的量成正比例的關系，與標準品或樣品中AFM1的量成反比例關系。所以，標準品或樣品中的AFM1濃度越高，顯色的藍色將會越淺。加入酸，終止反應，底物顏色由藍色變?yōu)樽攸S色。微孔板放進酶標儀里，在OD_450nm 讀取吸光度值。樣品的吸光度值與試劑盒中標準OD值相比較，相對應得出結果。

1、使用前將試劑拿到室溫。

2、將裝試劑的小袋開封，根據(jù)待測的標準品和樣品的數(shù)量取出一定量的微孔。

3、將不使用的微孔重新放入小袋，封好口避免潮濕的空氣進入。（分析檢測完畢微孔支架將來可以繼續(xù)使用。）

4、每次都要使用新吸頭，吸取200μL 標準品或樣品加到兩個復孔里。

5、將板子裝入袋子中封口，避免水蒸氣揮發(fā)和紫外光的照射。

6、在室溫（19℃-25℃）下孵育2h。

7、將孔里的液體倒入合適的容器中，從洗瓶里吸取PBST洗板或用多道洗板洗孔，然后迅速棄掉洗液到合適的容器中，重復洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。

8、每個孔中加入100μL的偶聯(lián)物（綠色蓋子）。

9、再次用袋子封好板子，室溫下孵育15min。

10、重復步驟7。

11、每個孔中加入100μL 酶反應底物（TMB）孵育15-20min。

12、加入100μL的終止液終止反應，板中顏色將會由藍色變?yōu)樽攸S色。

13、450nm 下讀取每個孔的吸光度值（OD），使用一個空白對照或者使用不同的630nm下濾光片。

第一次孵育標準品和樣品階段，可以在4℃-6℃過夜，顯著的改善樣品為5ppt和更大濃度時0濃度抑制結合率。如果選擇這個步驟，接下來偶聯(lián)物和TMB的孵育可以在室溫下進行。

檢測極限規(guī)定為2ppt（ng/L）, 2個標準偏差低于0濃度檢測結果的平均OD值(n=18, CV<2%)。

使用原有的OD值或實驗獲得的OD值與標準曲線中AFM1濃度為0時OD值的百分比值建立劑量效應曲線。通過在標準品曲線中添加新數(shù)值計算被測物質中AFM1的濃度。

標準品和樣品獲得的平均吸光度值除以標準品濃度為0時的吸光度值乘以100，標準品濃度為0時為100%，其他標準品和樣品吸光度值都以這樣的形式表示。

標準品數(shù)值輸入到坐標圖的坐標系統(tǒng)中，計算AFM1的濃度ng/L。根據(jù)相應的吸光度值每個樣品都能從坐標曲線中讀出AFM1的濃度含量ng/L。

為了獲得樣品中AFM1的精確含量ng/L數(shù)據(jù)，從標準曲線讀取的濃度應該乘以相應的稀釋倍數(shù)。牛奶樣品乘以1，乳酪樣品乘以5。