上海卓康以質(zhì)量為本，樹立“卓康質(zhì)量”是公司的發(fā)展目標(biāo)。我們一直加倍努力，竭盡全力做到不辜負(fù)您的支持與信賴。同時(shí)公司也離不開廣大客戶的幫助支持，真誠邀請(qǐng)國(guó)內(nèi)外有實(shí)力的實(shí)驗(yàn)室、生物技術(shù)公司合作，共同發(fā)展。 目前卓康提供的服務(wù)范圍包括：生物合成siRNA、shRNA的制備；轉(zhuǎn)錄編碼shRNA的DNAs、轉(zhuǎn)錄編碼shRNA的質(zhì)粒載體訂購；siRNA靶位的設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)選擇分析；siRNA相關(guān)試劑和RNA技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品的代理銷售；重組病毒構(gòu)建包裝；基因蛋白表達(dá)、載體構(gòu)建、多克隆抗體和單克隆抗體制備；多種細(xì)胞學(xué)服務(wù)；常用的分子生物學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)儀器、實(shí)驗(yàn)耗材銷售等。 卓康在分子生物學(xué)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，特別抗體制備技術(shù)方面同樣具有豐富經(jīng)驗(yàn)，提供快速、優(yōu)質(zhì)、性價(jià)比高的實(shí)驗(yàn)服務(wù)。 九、Western Blotting免疫蛋白印跡技術(shù)服務(wù)（代做wb實(shí)驗(yàn)） WESTERN BLOT是以電泳分離組分，將其從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固相支持體，繼之以針對(duì)特定氨基酸序列的特異性抗體作為探針檢測(cè)目的蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。 免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。 上海卓康生物科技有限公司為您提供全套免疫印跡(Western blotting)技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用高質(zhì)量試劑完成 ●主要實(shí)驗(yàn)步驟如下： 1. 蛋白質(zhì)抽提 a.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品，取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。 b.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細(xì)胞，PBS清洗細(xì)胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。 2. 蛋白質(zhì)定量 按KCTMBCA蛋白質(zhì)定量試劑盒操作說明操作，測(cè)定樣品濃度。 3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE) 將準(zhǔn)備好的樣品液和生物素標(biāo)記的蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)分別上樣，標(biāo)準(zhǔn)加進(jìn)第一個(gè)孔中，電泳分離蛋白。 4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或PVDF膜 按Bio-Rad蛋白轉(zhuǎn)移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，30mA恒流條件下，4°C轉(zhuǎn)移過夜。 5. 膜的封閉和抗體孵育 a．膜在5％BSA溶液中室溫孵育1小時(shí)以封閉膜上的非特異結(jié)合。 b.封閉過的膜加入一級(jí)抗體室溫孵育1.5小時(shí)，抗原抗體結(jié)合。 c.加入HRP標(biāo)記的二級(jí)抗體以結(jié)合一級(jí)抗體及HRP標(biāo)記的抗生物素抗體以結(jié)合分子量標(biāo)準(zhǔn)，室溫孵育膜1小時(shí)。加入HRP標(biāo)記的GAPDH抗體可同時(shí)檢測(cè)GAPDH含量。。 6. 結(jié)果檢測(cè) 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，膜與化學(xué)發(fā)光底物孵育，經(jīng)X膠片曝光顯影。圖片掃描保存為電腦文件，并用ImageJ分析軟件將圖片上每個(gè)特異條帶灰度值的數(shù)字化。 7. 數(shù)據(jù)分析 目的蛋白的灰度值除以內(nèi)參GAPDF的灰度值以校正誤差，所得結(jié)果代表某樣品的目的蛋白相對(duì)含量。 8. 提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告 包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表。。 試劑耗材： SDS、甘油、Tris、溴酚藍(lán)、丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED，APS、甘氨酸、甲醇、PVDF膜、Brandford蛋白定量試劑盒、BSA、脫脂奶粉、考麻斯亮藍(lán)、麗春紅、氯化鈉、氯化鉀、DTT、ECL、顯影液、定影液等、顯影膠片。 儀器設(shè)備： 超聲儀、核酸蛋白定量?jī)x、Western-blot電泳轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)、搖床、曝光合、紅燈等。 樣本準(zhǔn)備：收集106細(xì)胞，加入150μl，冰上超聲5次，定量。 SDS-PAGE 電泳： 1.準(zhǔn)備各溶液。 小燒杯兩個(gè)，5ml槍頭6個(gè)，吸水紙，罐膠電泳設(shè)備。 2.準(zhǔn)備罐膠槽。 將玻璃板擦干凈，放入短架子內(nèi)，薄板靠門，兩玻璃板及架子的底緣須在同一平面（否則漏膠）；將濕潤(rùn)的墊片墊于長(zhǎng)架子上并鋪上密封膜；將短架子裝在長(zhǎng)架子上（短架子底緣須與墊片緊密接觸，否則漏膠）。 3.準(zhǔn)備配膠。 將各溶液（ddH2O，單體，Tris-HCl，SDS，TEMED，APS）依次擺好，5ml槍頭插于長(zhǎng)罐膠槽，調(diào)好取TEMED、APS的槍。 4.配分離膠。 在一小燒杯上裝半杯ddH2O；另一小燒杯依次加上述各液（加TEMED、APS時(shí)要迅速），快速搖勻。 注：膠濃度由需要檢測(cè)的蛋白大小決定。 5.罐膠。 從玻璃板中間注入膠液，注膠速度均勻，不要產(chǎn)生氣泡。罐膠后用ddH2O壓膠。 6.等待時(shí)： 將Tris-HCl換成pH6.8。換取Tris-HCl及罐膠用的槍頭。調(diào)好各移液器。 7.30分鐘后。 倒掉壓膠水，用濾紙吸干殘留水，注意不要觸及膠面。 8.配集成膠。 參見步驟4。 9.罐膠。 參見步驟5，灌滿為止，不要有氣泡。 10.插梳。 梳柱下面不要有氣泡。 11.等待時(shí)。 A：配電泳緩沖液。B：將樣本煮沸5分鐘。C：水中冷卻，短暫離心后依加樣序排放好。D：等膠近凝時(shí)，將玻璃板裝在電泳架子上，罐內(nèi)槽液于槽中，檢查是否密封。E：將上槽架子按于槽中。 12.30分鐘后。 罐上槽液超過短玻璃板，拔梳（注意力道適中，不能太快）。放置上樣架子。 13.上樣30μl。 槍頭先伸入至快接近膠面時(shí)開始降將上樣液緩緩打出，使樣品液從膠面往上漲，槍頭隨液面上漲而上提?？梢圆话炎詈笠坏螛悠反虺?，但是每個(gè)樣品都須同樣處理。 14.加外槽液。 15.電泳。 轉(zhuǎn)膜： 1.準(zhǔn)備。 分別準(zhǔn)備泡膜和轉(zhuǎn)膜用的試劑和用具，在電泳槽中倒好轉(zhuǎn)膜液 2.揭膠。 電泳結(jié)束后，將電泳槽移至水池中，倒掉電泳液，將內(nèi)槽提起放在水池邊，取出兩邊玻璃板。用純水沖干凈玻璃板，小心揭開短板，去掉集成膠，小心將膠轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)膜液在中。 3.轉(zhuǎn)膜。 將夾子打開，黑色在底，依次放置海綿、濾紙、膠、膜、濾紙、海綿，關(guān)好夾子（均在液面下進(jìn)行，注意氣泡）快速放入架子中。在電泳槽中放冰袋。 4.電泳。 封閉及孵抗體： 1.轉(zhuǎn)膜等待時(shí) 準(zhǔn)備封閉液（即Non-fat milk 5% in TBST）。 2.轉(zhuǎn)膜完畢后， 將膜放入封閉液中，輕搖孵育1小時(shí)。 3.孵一抗。 將封閉好的膜在轉(zhuǎn)移到一抗盒子中，室溫孵育兩小時(shí)或4℃過夜， 4.洗滌 將孵育好一抗的膜在TBST洗滌3次，每次5分鐘。 5.孵二抗。 將洗好的膜放在二抗中室溫孵育兩小時(shí)。 6.洗滌。 將孵育好二抗的膜在TBST洗滌3次，每次5分鐘。 7.ECL化學(xué)發(fā)光和曝光顯影。 客戶方需提供： 1、 第一抗體( 如Cell signaling technology, Cayman Chemical, Santan Cruz, Zymed等著名抗體公司。) 2、 預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本 3、 正式實(shí)驗(yàn)樣本 ★ 公司方提供： 1、 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2、 正式實(shí)驗(yàn)結(jié)果 如客戶只需要進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)研究，我方可只代理預(yù)實(shí)驗(yàn)業(yè)務(wù)并提供結(jié)果。 ★ 實(shí)驗(yàn)周期與費(fèi)用： 預(yù)實(shí)驗(yàn)的費(fèi)用以欲檢測(cè)目的蛋白的種類數(shù)目（或第一抗體種類數(shù)目）計(jì)算，公司將在材料和實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)全部到位的工作日后20個(gè)工作日之內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果。正式實(shí)驗(yàn)費(fèi)用欲檢測(cè)目的蛋白的種類數(shù)目（或第一抗體種類數(shù)目）和樣本數(shù)為單位計(jì)算，實(shí)驗(yàn)周期為20個(gè)工作日，公司將在材料和預(yù)付的實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)全部到位的工作日后20個(gè)工作日之內(nèi)提交實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如客戶要求在10個(gè)工作日之內(nèi)完成，每單位樣品費(fèi)用為常規(guī)周期的兩倍。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以膠片的形式提交給客戶 。 收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn) 項(xiàng)目 價(jià)格 總蛋白質(zhì)提取 50 元每個(gè)樣品 WB 實(shí)驗(yàn)費(fèi) 每張膜可做1-8個(gè)樣品 1400元/膜 WB 預(yù)實(shí)驗(yàn)費(fèi) 600元每個(gè)指標(biāo) 上海卓康生物科技有限公司 聯(lián)系電話：021－55660344，021－55063976 傳真：021－55660344 網(wǎng)址：www.elisabio.com 網(wǎng)址：www.antibodybio.com 聯(lián)系人：黃力，業(yè)務(wù)qq: 909447355 公司對(duì)外郵箱：sales@elisabio.com，hyperheal@gmail.com