打開離心機，冷卻至4℃。并將所用試劑、緩沖液、實驗、解剖工具、組織勻漿工具以及離心機轉子等預冷至4℃（或放在冰上預冷）。

1.1麻醉

麻醉大鼠（麻醉藥物注射/氣體麻醉均可）

1.2分離步驟

a)處死大鼠，從顱骨中解剖大腦（可選擇需要的腦區(qū)），將解剖后部分轉移至4℃分離緩沖液A（緩沖液配方見文末）中，洗去雜質。

b)將組織從緩沖液取出，吸干多余水分，稱量，測定濕重。稱后，仍轉移到轉移至4℃分離緩沖液A中短時間保存

c)準備組織勻漿化：將組織取出，用分離緩沖液A潤濕，用尖頭剪刀（如眼科剪）將組織剪碎，剪至糊狀小塊。

d)使用4℃分離緩沖液A重懸組織糊狀小塊，然后轉移到預冷玻璃容器或離心管（該步驟可選擇將組織移入特定勻漿機套管中，重懸液體積可根據容器情況調整）中。

e)在1000轉/分鐘的轉速下或手動玻璃研磨，研磨8-10次，得到均勻無塊狀組織液。

f)轉移到50ml 離心管中，調整體積，得到約5%成分的勻漿液 (即每20 - 30ml勻漿液含有1g組織)。

g)4°C、1000 g離心10分鐘，留下上清液。

h)將上清液轉移到新管中， 4°C、6200 g離心10分鐘，棄上清液。

i)使用分離緩沖液B重懸線粒體(沉淀)， 4°C、6200 g離心10分鐘，棄上清液。

j)將沉淀物（即線粒體）重新懸浮在少量分離緩沖液B中（約1g組織中的線粒體懸浮液體積約1ml）。

k)將提取好的純化線粒體用于實驗。

02

試劑

2.1分離緩沖液A

用Tris, HCl調節(jié)pH值至7.4

2.2 分離緩沖液B

不含BSA的分離緩沖液A。

03

參考文獻

Sumbalová Z, Kucharská J, Kristek F (2010) Losartan improved respiratory function and coenzyme Q content in brain mitochondria of young spontaneously hypertensive rats. Cell Mol Neurobiol 30:751-8.

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