SYBR Green I熒光定量PCR 　　SYBR Green I與dsDNA 結(jié)合熒光信號可增強(qiáng)800―1000倍。在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR Green I熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，熒光信號增強(qiáng)，而不摻入鏈中的SYBR Green I染料分子熒光不變，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。熒光可以在退火階段或者延伸階段測定。 使用濃度對熒光PCR結(jié)果的影響 　　SYBR Green I熒光定量PCR的試驗成功有很多因素，但是SYBR Green I的使用濃度是非常關(guān)鍵的因素 ，如果SYBR Green I的濃度過低會使熒光信號的變化降低。這就意味著低拷貝的樣品可能無法檢出；而在高濃度時，將會抑制PCR反應(yīng)。降低PCR反應(yīng)效率。所以一般在使用SYBR Green I時應(yīng)根據(jù)實際情況優(yōu)化使用濃度。 　　我們提供的為20×的濃縮液，使用時可稀釋20―100倍，即使反應(yīng)的終濃度為1×到0.2×之間。 鎂離子濃度的影響 　　提高鎂離子濃度可以降低SYBR Green I對PCR反應(yīng)的抑制作用。我們建議在用SYBR Green I進(jìn)行熒光PCR反應(yīng)時，鎂離子濃度要比無SYBR Green I 的普通 PCR 反應(yīng)要高出 0.5 到3mM。